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温度对脱色效果的影响将溶液的 值调至 的恒温水浴下振荡测定并计

归档日期:07-20       文本归类:正交树      文章编辑:爱尚语录

  温度对脱色效果的影响将溶液的 值调至 的恒温水浴下振荡测定并计算多糖脱色率 结果如图 所示。 温度 可以看出不同的树脂脱色的最适温度不同。 的时候脱色最好。随着温度升高色素分子扩散速度加快 有利于色素的吸附 当超过树脂的最适脱色温度时 色素的解吸速度同样会加快 脱色率也会随之下降 因此选择 作为正交

  温度对脱色效果的影响将溶液的 值调至 的恒温水浴下振荡测定并计算多糖脱色率 结果如图 所示。 温度 可以看出不同的树脂脱色的最适温度不同。 的时候脱色最好。随着温度升高色素分子扩散速度加快 有利于色素的吸附 当超过树脂的最适脱色温度时 色素的解吸速度同样会加快 脱色率也会随之下降 因此选择 作为正交试验的温度研究范围。 正交设计确定脱色的最佳工艺条件在单因素试验的基础上采用正交试验法确定 多糖提取液的最佳脱色条件 按照三因素三水平 正交设计 见表 可以看出树脂种类对于脱色率影响较大 温度次之 值对脱色率影响最小。这与 多糖溶液中色素分子所带的电荷、疏水性、极性、是否容易与树脂表面集团形成氢键有关。综合考虑 得出最佳脱色条件是 树脂 温度 可以看出对于 三种树脂温度对 多糖保留率较 影响大 温度升高 树脂活化程度高 树脂对糖和色素分子的吸附能力强。 的时候多糖保留率最高。综合考虑 得出最佳多糖保留率条件是 上海海洋大学硕士论文 影响条件最佳条件 树脂种类 温度 多糖保留率的板差分析表序号 影响条件树脂种类温度 值最佳条件 可以看出树脂种类对于蛋白质去除率的影响较大 温度值次之 对蛋白质去除率影响最小。在一定的温度和 范围内 不同类型的树脂对蛋白质上海海洋大学硕士论文的吸附情况不一 对蛋白质的吸附能力最弱 对蛋白质吸附较好 次之 相差不多。综合考虑得到最佳蛋白质去除率条件为 树脂 温度 蛋白去除率的极差分析表考虑脱色率、多糖保留率、蛋白质去除率三项指标 虽然 的蛋白去除率最好 但不是远远高于 在脱色率和多糖保留率方面最优因此最终确定 多糖的最佳脱色条件为 树脂 温度 。在最佳的条件下 多糖脱色率可达到 多糖保留率为 蛋白质去除率为 。上海海洋大学硕士论文第三节灵芝子实体多糖的分离纯化灵芝多糖常用的分离纯化方法有分部沉淀法、超滤法、阴离子柱交换层析法、凝胶柱层析法、季铵盐沉淀法等【 本实验中采用将阴离子柱交换层析法和凝胶柱层析法结合 以期得到较好的分离纯化效果。 材料与方法 材料 为灵芝子实体经提取超滤分级所得分子量大于 的粗多糖试剂 公司产品微孔滤膜 孔径 为上海兴亚净化材料厂生产 葡萄糖标品 蛋白分析试剂盒购自美国 公司 系列标准分子量葡聚糖 公司产品氯化钠 苯酚 浓硫酸 盐酸及氢氧化钠 均为国产分析纯。 粗多糖的阴离子交换柱层析取 溶于蒸馏水中 配成 的溶液 离心 取上清液 阴离子柱。先以蒸馏水洗脱 再以 梯度洗脱。洗脱液每收集 填料为具体洗脱程序见表 。分部收集的洗脱液每隔 管用苯酚硫酸法检测 以吸光度为纵坐标 收集管数为横坐标作图 得到洗脱曲线。根据苯酚琉酸法测定的结果与触 上的紫外结果对比 将洗脱液分成三部分。第一部分为水洗部分 命名为 第二部分为盐洗脱基本无颜色部分 命名为 第三部分为盐洗脱但有颜色的部分 命名为 。分别收集各洗脱部位的洗脱液 浓缩后透析脱盐 冷冻干燥。 粗多糖的凝胶柱层析将离子交换柱层析分离得到的样品配成 溶液 离心 上海海洋大学硕士论文过凝胶柱 采用 层析系统填料为 洗脱液为 溶液 流速为 上样体积为 分部收集 体积为 示差折光检测器检测。分别收集每个部位透析 冷冻干燥后反复过凝胶柱纯化。表 阴离子柱层析程序 洗脱液均经孔径滤膜抽滤 多糖的纯度鉴定和分子量测赳 去离子水配制缓冲液 其中 溶液将值调到 再加 以防腐所配制的溶液用 的滤膜抽滤去杂质 并用超声或真空脱气。 纯度鉴定 取待分析样品 缓冲液中充分溶解 离心吸取上清液至 色谱瓶中准备上样分析。 的具体分析测试条件如下 串联使用紫外检测和示差检测同时进行 流速为 上样。在凝胶柱的分子量分析范围内所记录峰为单一对称峰则表明所分析样品为均一多糖。 分子量测定 取葡聚糖标准品 各上海海洋大学硕士论文溶于 缓冲液中 离心 中的方法上样测定保留时间。根据标准品的保留时间绘制标准曲线 然后样品根据所绘制的标准曲线和方程计算其相对分子量。 结果与分析 粗多糖的阴离子交换柱层析结果 阴离子交换层析柱分离后得到三个组分 分离洗脱曲线见图 第一部分为水洗部分 命名为 第二部分为盐洗脱基本无颜色部分 命名为 第三部分为盐洗脱但有颜色的部分 命名为 。各部位收集浓缩、透析脱盐 然后冷冻干燥 各组分的得率如表 所示。 两部分的得率较高基本无色 易于凝胶柱分离 因此选择这两个多糖组分进行凝胶柱分离纯化。 的阴离子柱交换层析多糖的凝胶柱层析结果 柱层析主要得到两个峰分别命名为 柱层析所得各组分的产量和得率样品名称产量 样品回收率残渣 层析色谱图上海海洋大学硕士论文一一曲 层析色谱图样品的纯度鉴定 测定结果表明 见图 从灵芝子实体中得到的两种水溶性多糖组分为均一多糖。样品的分子量测定根据标准曲线图 根据保留时间计算其分子量如下表

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